Токсоплазмоз кошек (IgG) Авидность, ИФА (Euroimmun, Германия)

Возбудителем токсоплазмоза - распространённого по всему миру заболевания - является Toxoplasma gondii класса Sporozoa. Кошки заражаются, в основном, при поедании сырого мяса инфицированных грызунов или других животных, реже встречается внутриутробное заражение ооцистами. В большинстве случаев у кошек токсоплазмоз развивается бессимптомно. Однако у котят, инфицированных внутриутробно, часто развиваются сильно выраженные клинические симптомы, которые приводят к смерти. Размножение паразита в кишечнике хозяина может приводить к диарее. Кроме кишечника, часто поражаются лёгкие, печень, центральная нервная система, поджелудочная железа или глаза. Заражённым кошкам свойственны такие клинические признаки, как угнетённое состояние, анорексия, лихорадка, желтушность слизистых оболочек и кожного покрова, диспноэ, атаксия или увеиты.

В настоящее время основным методом серологической диагностики острой инфекции и дифференциации ее от хронической и латентной инфекции, а также постинфекционного иммунитета, является определение антител класса IgM, которые, как правило, первыми обнаруживаются в крови инфицированных животных. Но их выявление нередко бывает ошибочным, а интерпретация результата - неоднозначной. Среди факторов, затрудняющих анализ, можно отметить слишком слабую или запоздалую продукцию IgM у некоторых животных, аномально долгую персистенцию IgM, неспецифическую продукцию IgM при поликлональной стимуляции B-клеток. Следует иметь в виду, что примерно у 20% зараженных кошек специфические IgM к Toxoplasma gondii не выявляются. Наличие персистирующих специфических IgM также встречается при инфекции Toxoplasma gondii. Альтернативным методом серологической диагностики острой инфекции является выявление антител класса IgG с низкой авидностью (сродством) к антигенам инфекционного агента.

Принцип исследования: обнаружение антител класса IgG с низкой авидностью.

Первый контакт иммунной системы с инфекционным агентом, как правило, вначале приводит к образованию антител с низкой авидностью. Развитие инфекционного процесса сопровождается клональным отбором B-клеток, продуцирующих антитела, в результате чего увеличивается содержание молекул специфических IgG с высокой авидностью. Если в сыворотке обнаружен IgG с высокой авидностью, можно предположить, что инфекция находится на поздней стадии. Чтобы идентифицировать антитела с низкой авидностью в образце пациента, исследуемый образец тестируют параллельно в двух лунках, применяя метод ИФА. После инкубации образца с антигенами, иммобилизованными в лунках, в одну из них добавляется раствор мочевины, в другую - буферный раствор. Под действием мочевины комплекс антигена с низкоавидными антителами разрушается, с высокоавидными - сохраняется. Затем образцы инкубируют с меченными пероксидазой антителами IgG кошки. После следующей инкубации с субстратом-хромогеном в лунках образуется окрашенный раствор, оптическая плотность (ОП) которого пропорциональна содержанию специфических IgG в образце. О наличии в образце низкоавидных IgG свидетельствует снижение ОП в лунке, в которую добавляли мочевину, по сравнению с контрольной лункой. Для количественной оценки используют относительный индекс авидности (RAI): отношение ОП в двух лунках, выраженное в процентах.

  При исследовании 306 случайно выбранных образцов сыворотки крови кошек 229 были идентифицированы как IgG отрицательные и 77 - положительные. В 5 образцах из 77 были обнаружены низкоавидные IgG, что указывает на острую инфекцию. 54 образца содержали высокоавидные антитела, свидетельствующие об инфекции в прошлом. 18 образцов показали пограничный результат, который указывает на стадию выздоровления после недавней инфекции.