CA 15-3, ИФА

Назначение

Опухолевый антиген 15-3 (СА 15-3) — сиалированный высокомолекулярный (приблизительно 400 кДа) гликопротеин. Уровень СА 15-3 предоставляет информацию о клинической стадии рака молочной железы. СА 15-3 более чувствительный, чем СЕА, маркер для раннего выявления рака молочной железы, однако по данным недавно проведенных исследований отмечается увеличение диагностической чувствительности при совместном определении обоих опухолевых маркеров. Высокие уровни СА 15-3 характерны для пациентов с раком молочной железы, однако повышенные уровни СА 15-3 также наблюдаются при ряде доброкачественных и злокачественных образований (см. Ожидаемые значения). Хотя специфичность и чувствительность СА 15-3 ограничены, этот маркер считается основным при диагностике рака молочной железы и при мониторинге лечения и течения заболевания у пациента. Более поздние стадии рака ассоциированы с более высокими уровнями СА 15-3.

Принцип метода

Набор HUMAN CA 15-3 Ag ELISA основан на прямом определении антигена классическим ИФА методом и предназначен только для профессионального использования. В нем использованы высоко аффинные и специфичные антитела (меченые ферментом и биотинизированные) с распознаванием различных и определенных эпитопов. В наборе используется высокоаффинная система биотин-стрептавидин. На лунки микропланшета нанесен стрептавидин. При первой инкубации образцы сыворотки, калибраторы или контроли и конъюгат В (моноклональные биотинилированные антитела) смешиваются, образуя комплекс «антиген-антитело», связанный с поверхностью лунок за счет взаимодействия биотина с иммобилизированным стрептавидином.
После инкубации несвязавшиеся компоненты удаляются промывкой, затем в лунки вносится ферментный конъюгат Е (стадия 2). Он связывается с иммобилизированным комплексом антитело – антиген, образуя конечный «сэндвич»-комплекс. После инкубации несвязавшийся конъюгат удаляют промывкой и добавляют в лунки субстрат (стадия 3), что приводит к образованию окрашенного в синий цвет продукта, который меняет цвет на желтый при добавлении стоп-реагента, вносимого для остановки реакции. Интенсивность окраски прямо пропорциональна концентрации СА 15-3 в образце.
Оптическая плотность калибраторов и образцов измеряется при помощи специальных фотометров для микропланшетов или автоматических анализаторов (например, приборы линии HUMAREADER или ELISYS производства фирмы HUMAN) при длине 450 нм. Численное значение концентрации определяется с помощью калибровочной кривой, построенной по калибраторам с известной концентрацией СА 15-3, входящим в состав набора.
Наборы HUMAN ELISA могут быть выполнены как с использованием ручной техники выполнения анализа, так и с применением автоматических анализаторов. Методики выполнения анализов с помощью наборов HUMAN ELISA уже предустановленны на приборах фирмы HUMAN, но могут слегка отличаться от ручной техники выполнения анализа.