Тропонин I // Troponin I ELISA (Biomerica, США)

Назначение

Тест Biomerica Тропонин I ИФА (Biomerica cTnl ELISA) – диагностическая in vitro иммуноферментная (ИФА) тест-система для количественного определения кардиоспецифического тропонина I в сыворотке крови человека. Измерение концентрации тропонина I необходимо при диагностировании острого инфаркта миокарда (ОИМ).

Введение

Тропонин является ингибиторным или регулирующим сокращения белковым комплексом поперечно-полосатой мышечной ткани. Он располагается периодически вдоль тонких миофиламентов и состоит из трех отдельных белков: тропонина I, тропонина С и тропонина Т.В свою очередь субъединица тропонина I существует в трех различных изоформах, двух – в быстро- и медленносокращающихся волокнах скелетных мышц и одной – в сердечной мышечной ткани. Сердечная изоформа (cTnl) примерно на 40% отлична от двух других изоформ, ее молекулярная масса 22500 Да, в ее составе 31 дополнительный аминокислотный остаток, отсутствующий в изоформах скелетных мышц.Антитела, вырабатываемые на эту изоформу, иммунологически отличны от антител, вырабатываемых на две изоформы скелетных мышц.Уникальность и тканевая специфичность сердечной изоформы тропонина I позволяет использовать ее в целях диагностики острого инфаркта миокарда (ОИМ). Сердечный тропонин I (cTnl) используется в дифференциальной диагностике у больных, доставленных в отделение скорой помощи с жалобой на боль за грудиной. Диагноз инфаркт миокарда ставят, когда концентрации в крови чувствительных и специфичных биомаркеров, таких как cTnl, изофермент МВ креатинкиназы (СК-МВ) и миоглобин, возрастают до уровней, характерных для острой ишемической болезни.Сердечный тропонин (I или Т) описан совсем недавно и является предпочтительным биомаркером при поражениях миокарда. Тропонин сердечной мышцы представляет ткань миокарда специфично и с высокой чувствительностью. Как cTnl, так и СК-МВ выделяются в кровь почти одновременно (через 4-6 часов после приступа боли), однако уровень cTnl остается повышенным значительно дольше (6-10 дней), позволяя устанавливать причину поражения сердца в течение более длительного срока. Нормальные уровни cTnl в крови очень низки. После приступа ОИМ уровни cTnl существенно возрастают и могут быть измерены в сыворотке крови через 4-6 часов. Пик концентраций достигается примерно к 12-24 часам после инфаркта. Тот факт, что уровень cTnl в сыворотке крови остается высоким в течение продолжительного периода времени, является его преимуществом на фоне его повышенной диагностической чувствительности и кардиологической специфичности, а также возможности устанавливать ОИМ значительно раньше после приступа ишемии (4 часа), чем традиционными методами. С помощью cTnl возможна также диагностика периоперационного инфаркта в ситуациях, когда предполагается высокий уровень в сыворотке крови белков скелетных мышц. К тому же, по последним данным, существует измеримая взаимосвязь между уровнем тропонина миокарда и исходом хронического заболевания после приступа загрудинной боли. Согласно исследованиям, cTnl имеет большое прогностическое значение в выделении группы высокого риска среди пациентов с нестабильной стенокардией. Также этот анализ может иметь большое значение при оценке состояния пациента перед выпиской из отделения скорой помощи. Тест Biomerica Тропонин I ИФА представляет быстрый, чувствительный и надежный анализ для количественного определения кардиоспецифического тропонина I. Антитела, использованные в тесте, выявляют минимальную концентрацию 1,0 нг/мл и не реагируют перекрестно с сердечным тропонином Т или тропонином Т или I скелетных мышц.

Принцип метода

Тест Biomerica Тропонин I ИФА представляет собой твердофазный двухсайтовый метод иммуноферментного анализа. В тесте используются четыре уникальных мышиных моноклональных антитела к разным антигенным детерминантам молекулы тропонина I. Три антитела к тропонину I иммобилизованы на твердой фазе (поверхности лунок планшета). Четвертое антитело конъюгировано с ферментом (пероксидазой из корня хрена). В данном анализе калибраторы или образцы сыворотки крови пациентов одновременно инкубируются с четырьмя антителами, в результате чего молекула тропонина I образца оказывается в «сэндвиче» между антителами твердой фазы и антителами, мечеными ферментом. После 90-минутной инкубации при комнатной температуре лунки планшета промывают водой для удаления несвязавшихся компонентов. Добавляют раствор Реагента тетраметилбензидина (ТМБ) и инкубируют в течение 20 минут, в результате развивается голубое окрашивание. Реакцию останавливают добавлением в лунки 1N раствора соляной кислоты (HCl), при этом цвет раствора становится желтым. Интенсивность окрашивания прямо пропорциональна концентрации тропонина I в образце. Оптическую плотность измеряют с помощью спектрофотометра при 450 нм.