Аутоантитела к декарбоксилазе глутаминовой кислоты // Isletest-GAD ELISA (Biomerica, США)

Назначение

Isletest-GAD представляет собой иммуноферментный тест для качественного определения циркулирующих аутоантител к декарбоксилазе глутаминовой кислоты (GAD) в сыворотке крови пациентов с повышенным риском развития инсулинозависимого диабета.

Введение

Инсулинозависимый диабет (ИЗД), или диабет первого типа вызывается аутоиммунной деструкцией β-клеток поджелудочной железы. Селективное аутоиммунное поражение клеток ведет к полному прекращению секреции инсулина. Аутоиммунная этиология ИЗД подтверждается присутствием циркулирующих аутоантител к антигенам поджелудочной железы в сыворотке крови пациентов. В настоящее время идентифицировано по крайней мере три типа подобных аутоантител, а именно: антитела к клеткам островков Лангерганса (Islet Cell Autoantibodies, ICA), инсулину (Insulin Autoantibodies, IAA) и декарбоксилазе глутаминовой кислоты. Декарбоксилаза глутаминовой кислоты представляет собой биосинтетический фермент или нейротранзмиторный ингибитор гамма-аминомасляной кислоты (GABA). Существуют две формы GAD с молекулярным весом 65 и 67 килодальтон, кодируемые одним геном и обладающие высокой гомологичностью. Обе формы GAD выявляются в ткани мозга и поджелудочной железы как у человека, так и у других млекопитающих (крысы, мыши). Исходя из того, что ИЗД является хроническим аутоиммунным заболеванием, характеризующимся деструкцией β-клеток поджелудочной железы, диагностика этого заболевания еще до появления клинических симптомов может помочь предотвратить развитие необратимых последствий. Таким образом, целесообразно проводить скрининг популяции с высоким риском развития диабета на наличие всех трех типов аутоантител, характерных для ИЗД. Наличие, как минимум, двух маркеров указывает на высокую вероятность развития ИЗД обычно в течение последующих 5-7 лет.

Принцип метода

Тест основан на принципе твердофазного непрямого иммуноферментного анализа. Очищенные антигены GAD адсорбированы в лунках стандартного микропланшета. При внесении в лунки контролей и разведенных исследуемых сывороток, присутствующие в них антитела к GAD связываются с иммобилизованными антигенами. Не связавшиеся антитела удаляются промывкой. После этого в лунки вносятся антитела к IgG человека, меченые ферментом (конъюгат), которые связываются с комплексом «антиген-антитело», иммобилизованным на поверхности лунок. Не связавшийся конъюгат удаляется промывкой. Добавление субстрата приводит к развитию окраски, интенсивность которой прямо пропорциональна концентрации антител к GAD и может быть измерена фотометрически.