Назначение и принцип метода
До проведения иммуноферментного анализа проводится модифицирование 5-ГИУК метилированием. Набор 5-HIAA ELISA основан на твердофазном конкурентном варианте иммуноферментного анализа. На поверхности лунок планшета (твердой фазе) иммобилизованы молекулы антигена. Молекулы модифицированной 5-ГИУК, содержащиеся в стандартах, контролях и исследуемых образцах, и иммобилизованные на твердой фазе конкурируют за ограниченное число центров связывания специфичных антител антисыворотки. После того, как реакция связывания достигнет равновесия, несвязавшиеся с твердой фазой антигены и комплексы «антиген-антитело» удаляются промывкой. Антитела, связавшиеся с иммобилизованным на твердой фазе антигеном, выявляются с помощью конъюгата — антител к IgG кролика, меченных пероксидазой. В качестве субстрата используется тетраметилбензидин (ТМБ). Интенсивность цветовой реакции измеряют при длине волны 450 нм. Количество 5-ГИУК в исследуемых образцах рассчитывается по калибровочной кривой, построенной по известным концентрациям в стандартах.
